Aplicación del laparoscopio veterinario en la recolección de ovocitos bovinos Fertilización in vitro
Aplicación del laparoscopio veterinario en la recolección de ovocitos bovinos en fertilización in vitro.
La tasa de recuperación de los ovocitos recolectados por técnica laparoscópica es más simple que la de recolectar óvulos directamente del ovario. Además, la laparoscopia veterinaria se puede utilizar para controlar el desarrollo folicular.
Inserción del laparoscopio: Inserte el trócar romo en la cánula, inserte la cánula en la vagina, coloque el extremo frontal de la cánula en la posición predeterminada de la bóveda vaginal a través del agarre rectal, luego retire el trócar romo, inserte el trócar piramidal y ajustar el ángulo. Haga la dirección del trócar y el eje largo de la vaca ligeramente hacia la derecha en un ángulo de 10 °, y penetre con fuerza la bóveda vaginal hacia arriba. Si la resistencia disminuye repentinamente, indica que se ha perforado la bóveda vaginal. En este momento, saque el trocar. Cuando escucha el sonido del aire entrando y la mano que sostiene el recto siente la expansión de la cavidad abdominal al mismo tiempo, indica que la posición de perforación es correcta. La funda de acero inoxidable con el cuerpo del endoscopio se inserta en la funda. Según la sensación del recto, si la cavidad es pequeña, es necesario llenarla con algo de CO2. La velocidad de la entrada de aire debe controlarse generalmente a 7 ~ L / min. La cantidad de gas que se llena depende del tamaño de la vaca."Generalmente, ronda los 9L.
Recolección de ovocitos: el operador de prensión rectal debe ajustar constantemente la posición del laparoscopio y el ovario, y mostrar la forma de los folículos y el cuerpo lúteo en diferentes posiciones del ovario, para determinar los folículos que deben perforarse. Un asistente capta la contraseña del operador y el folículo que se muestra en la pantalla de acuerdo con el recto, opera la aguja de punción, recolecta el líquido folicular y coloca el líquido folicular en el tubo de recolección que se ha agregado con una pequeña cantidad de líquido de cultivo. Otro asistente es responsable de operar la bomba de vacío de pie. Para evitar la pérdida de ovocitos, se debe poner en marcha la bomba de vacío (la presión negativa debe ser de 100 mm Hg) antes de la punción. Después de la recolección, el líquido folicular se coloca en la gradilla de tubos de ensayo durante 5-10 minutos, y el líquido folicular en la parte inferior del tubo de recolección se aspira en la placa con una pajita y luego se observa con un microscopio óptico. Y los ovocitos detectados se succionan en el tubo delgado. Los dos extremos del tubo delgado se sellan y los ovocitos se pueden transportar al laboratorio para un cultivo maduro. Una vez finalizada la operación, se saca el cilindro del endoscopio y los dos asistentes presionan a ambos lados de la pared abdominal de la vaca para expulsar el gas en la cavidad abdominal. Cuando ya no se descarga el gas, se saca la cánula y se revisa la vagina cada dos días para prevenir infecciones. Los dos extremos del tubo delgado se sellan y los ovocitos se pueden transportar al laboratorio para un cultivo maduro. Una vez finalizada la operación, se saca el cilindro del endoscopio y los dos asistentes presionan a ambos lados de la pared abdominal de la vaca para expulsar el gas en la cavidad abdominal. Cuando ya no se descarga el gas, se saca la cánula y se revisa la vagina cada dos días para prevenir infecciones. Los dos extremos del tubo delgado se sellan y los ovocitos se pueden transportar al laboratorio para un cultivo maduro. Una vez finalizada la operación, se saca el cilindro del endoscopio y los dos asistentes presionan a ambos lados de la pared abdominal de la vaca para expulsar el gas en la cavidad abdominal. Cuando ya no se descarga el gas, se saca la cánula y se revisa la vagina cada dos días para prevenir infecciones.
Precauciones:
1. Anestesia: ni demasiado superficial ni demasiado profunda. La anestesia eficaz es un requisito previo para completar la punción folicular para obtener ovocitos. Si la anestesia es demasiado superficial, la vaca sentirá dolor y afectará la precisión de la operación, por lo que se debe complementar la anestesia. Si la anestesia es demasiado profunda, la vaca no se mantendrá de pie de manera estable, ni siquiera se acostará, lo que también afectará la operación. Si la vaca está acostada, la operación debe detenerse inmediatamente y la cánula y el tubo laparoscópico deben retirarse rápidamente. Al mismo tiempo, se debe prestar atención a liberar el Baoding a tiempo para evitar lesiones a la vaca.
2. Punción: La pinza rectal debe sujetar correctamente el ángulo de punción al perforar la bóveda vaginal para evitar perforar el recto y el intestino grueso. Al perforar el folículo, la aguja no debe perforarse demasiado profundamente, de lo contrario dañará la sustancia ovárica y causará hemorragia. Esto no solo contaminará el líquido folicular, afectará la detección de ovocitos, bloqueará las agujas y los conductos, sino que también afectará el desarrollo de los folículos en el ovario. recuperar. En caso de sangrado, la punción del folículo debe detenerse inmediatamente, la aguja, el catéter y el tubo de recolección deben reemplazarse, y la aguja y el catéter deben enjuagarse con 0,01 mg de heparina / solución salina ML antes de la siguiente punción del folículo.
3. Recolección de líquido folicular: El líquido folicular recolectado debe mantenerse a una temperatura constante tanto como sea posible. Lo mejor es detectar los ovocitos inmediatamente después de la recolección, y ponerlos en medio de cultivo maduro que contenga FSH, empaquetarlos en tubos delgados y transportarlos al laboratorio, generalmente desde la cosecha hasta la incubadora para el cultivo de maduración no debe exceder las 4h.
4. Habilidades: El uso exitoso de este método requiere no solo un buen equipo, sino que también requiere que el operador tenga un alto nivel de conocimiento y competencia en la operación práctica, así como una estrecha cooperación con dos asistentes. Por tanto, la formación necesaria debe realizarse antes de la operación experimental.
Además, este método también se puede utilizar para obtener ovocitos de vacas jóvenes por adelantado, aumentando así el período de utilización y el potencial reproductivo de las vacas y acelerando el progreso genético. Este método será una buena forma de obtener fuentes de óvulos después de la superovulación y el uso de ovarios aislados.
